上海抚生 细胞转染操作方法
细胞转染（transfection）是指将dna或者rna导入真核细胞中的过程。转染的目的是产生重组蛋白，或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达。
一般常用的方法：脂质体转染法
     1、材料
     293t细胞、myod表达质粒和egfp表达质粒、dmem培养基、链霉素/青霉素(双抗)、fcs(小牛血清)、pbs(磷酸盐缓冲溶液)、胰酶/edta消化液、转染试剂(transfast)
     2、器材
     20ul/200ul/1ml微量移液器和tip头酒精灯、废液缸、血球计数板、涡旋振荡器、恒温水浴箱、台式离心机、35mm培养皿、转染管、15ml离心管、观察用倒置显微镜荧光显微镜和ccd
     3、实验步骤
     细胞传代
     (1)试验准备：200ul/1mltip头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。
     (2)弃掉培养皿中的培养基，用1ml的pbs溶液洗涤两次。
     (3)用tip头加入1mltrypsin液，消化1分钟(37。c，5%co2)。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。
     (4)加入1ml的含血清培养基终止反应。
     (5)用tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。
     (6)将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。
     (7)用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8x106个细胞加入一个35mm培养皿。
     (8)将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。
     (9)将培养皿转入co2培养箱中培养，第二天转染。

---

上海抚生实业有限公司