molt-4传代复苏细胞详细信息
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实验室细胞培养经验分享：
启蒙老师的重要性：一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作，在第一次的时候就要重视。
像养孩子一样养细胞：细胞真的很脆弱，最好每天都去看看它，以防止出现培养箱缺水、缺二氧化碳、停电、温度不够等异常现象，也好及时解决这些意外，避免重复实验带来的更大痛苦。
好细胞要及时保种：细胞要分批传代，这样即使有一批出了问题，还有一批备用的。像后者一般人可能不容易做到。但这是我血的教训，有一次细胞污染了，全军覆没。当时可后悔没有保种。
每种细胞都有自己的特性，要区别对待：细胞跟人一样，不同的细胞，培养特性是不一样的。培养过程中要细细体会。不同细胞株使用不同的培养基和血清。
如我养的平滑肌细胞很活跃，喜欢热闹，2~3天就好多人口，而且不太爱吃喝，真是最好养的孩子了。内皮细胞和平滑肌细胞性格相近，不过它很不讲卫生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要经常换洗才行。raw264.7细胞也很开朗，而且很能吃，要经常喂它，头疼的是细胞很容易活化，培养它的瓶子和环境没有内毒素才好，不过我这个当妈的很难满足它了。
培养前的工作准备充分：包括耗材的处理、试剂的配置，无菌检验等等。
玻璃器皿的清洗。对于玻璃器皿（细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等）要先用洗衣粉刷干净（注意死角），然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水冲洗 10 遍，除去残留酸液。瓶子之类，冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡24h。晾干后包扎，160℃干烤2h待用。
试剂配置。细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意ph值的调节。
无菌检验。主要采用过滤除菌：如胰酶、抗生素、g-418溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌：如pbs、d-hank's等。
试剂分装保存：包括营养液、胰酶、血清等。
血清特别重要。血清必须贮存于–20℃，如果一次无法用完一瓶，可将40～50ml分装于无菌酸处理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般厂商提供的血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。（一般情况下不影响细胞培养）" "
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细胞传代培养（消化法）标准操作规程
一、原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
二、材料和试剂
1. 无菌磷酸生理缓冲液(pbs)
2. 胰酶-edta溶液(0.05%胰酶-0.53mm edta-4na): 以10ml分装于15 ml无菌离心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回温。
3. 新鲜培养基
4. 无菌吸管/离心管/培养瓶
三、操作步骤
1. 传代前准备
（1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、pbs液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
（2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
（3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。
（4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
（5）准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。
（6）取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
（7）从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。
（8）打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
2. 胰蛋白酶消化
（1）加入消化液：小心吸出旧培养液，用pbs清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。
（2）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。
（3）吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。
3. 吹打分散细胞
（1）吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
（2）吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。
（3）平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。
（4）弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
4. 分装稀释细胞
（1）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
（2）分装：将细胞悬液吸出分装至2～3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。
（3）继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入co2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。
5. 悬浮型细胞的传代
（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000 rpm 5 分钟。
（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
注意事项：
1.严格的无菌操作。
2.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。
附：edta消化液配方：
edta 0.20g，nacl 8.00g，kcl 0.20g，kh2po4 0.02g，葡萄糖 2.00g，0.5％酚红4ml，加入蒸馏水定容至1000ml。10磅20min高压灭菌，使用时调节ph值到7.4。注意edta不能被血清中和，使用后培养瓶要彻底清洗，否则再培养时细胞容易脱壁。" "
细胞培养方面注意的几点：
无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射30分钟灭菌，以70 % ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol擦拭无菌操作抬面。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。
小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约 45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。
瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后，将血清放入，待温度升高到56℃后计时，一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清（包括不同批次）对细胞的影响。" "
公司提供部分atcc细胞有(限于页面篇幅，公司全部细胞并未展示，如有具体所需细胞，请咨询我们哦┈技┈术(订┈购)┈热┈线┈：┈０┈２┈１┈５┈４┈３┈８┈７┈６┈５┈６┈(┈１┈８┈３┈０┈１┈９┈０┈８┈２┈７┈９┈微┈信┈同┈号┈)┈联┈系┈q┈q：┈１┈２┈９┈２┈７┈５┈２┈１┈５┈７┈)；crl-2577|rko细胞；crl-2579|rko-as45-1细胞；crl-2578|rko-e6细胞；cl-187|ls 180细胞；ccl-225|hct-15细胞；ccl-221|dld-1细胞；crl-1469|panc-1细胞；crl-1918|cfpac-1细胞；crl-1435|pc-3细胞；crl-1682|aspc-1细胞；crl-1687|bxpc-3细胞；crl-1492|ar42j细胞；crl-1420|miapaca-2细胞；crl-2172|sw1990细胞；htb-80|capan-ⅱ/capan-2细胞；crl-2119|hpac细胞；htb-52|sk-hep-1细胞；hb-8064|hep-3b细胞；crl-2235|snu-182细胞；crl-5803|nci-h1299细胞；crl-11233|thle-3细胞；ccl-249|ncl-h548细胞；htb-171|nci-h446细胞；htb-180|nci-h345细胞；crl-2064|dms153细胞；ccl-257|nci-h1688细胞；htb-177|nci-h460细胞；htb-183|nci-h661细胞；htb-182|nci-h520细胞；crl-5883|nci-h1650细胞；crl-5908|nci-h1975细胞；crl-5844|nci-h838细胞；crl-5934|nci-h2227细胞；crl-1848|nci-h292细胞；htb-178|nci-h596细胞；crl-5800|nci-h23细胞；crl-5922|nci-h2087细胞；ccl-185|a549细胞；htb-53|a-427细胞；" "
c1948 tk10传代培养细胞株
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