转印电泳的一抗和二抗
转印电泳的一抗和二抗
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一抗孵育：将lg用稀释液稀释到适当的浓，在摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，上海小型蛋白电泳槽，可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间）
洗膜：用pbst或者tbst洗膜5 x 5min，如果预实验中发现背景过高，可以增加洗膜时间或洗膜次数
二抗孵育：二抗是辣根过氧化物酶(hrp)标记的lg， 摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可适当降低延长二抗孵育时间）
洗膜：用pbst或者tbst洗膜3 x 10min
t：tween-20（去污剂）
蛋白凝胶电泳的分类
蛋白凝胶电泳分为非变性凝胶和变性凝胶
所谓非变性凝胶，即在凝胶中不加sds和尿素等变性剂，这种凝胶中，蛋白质仍保持活性，其迁移率受它的静电荷与分子大小两个因素的影响。因此在非变性凝胶中进行电泳是不能测得分子量的，小型蛋白电泳槽价格，常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。
所谓变性凝胶，即在凝胶中加入变性剂，如尿素、sds(十二烷基磺酸钠)、dtt等。这些变性剂可以破坏或改变蛋白质的结构，把绝大部分蛋白质分离成组成它们的亚基。同时在蛋白质分子周围包围了大量负电荷。这种电荷基本上掩盖了无变性剂存在时正常就有的任何电荷。蛋白质在这种变性凝胶中的迁移率与它们分子量的对数成直线关系。因此利用变性凝胶进行电泳可以测得蛋白质的分子量。目前应用较多的变性剂为sds。
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琼脂糖水平电泳槽实验操作
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1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× tae或0.5×tbe。
注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉。
注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。
4.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入eb溶液使其终浓度为0.5ug/ml，并充分混匀（eb为危险品，不提倡使用）。 注意：eb是一种致癌物质。使用含有eb的溶液时，请戴用手套。eb在可见光下会分解。
5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5－8 mm 之间。
注意：不要产生气泡，溶液温度太高(>60℃)，会使得水分
过分蒸发，改变凝胶离子浓度，小型蛋白电泳槽多少钱，影响电泳效果。
6.在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置于电泳槽中进行电泳。
注意：凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。
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