本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入化的抗体和辣根Peroxidase标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、与亲和素特Y性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根Peroxidase的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗原浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。
选购原则:
1、是检测抗体还是抗原;
2、检测的结果是定性还是定量;
3、是否需要检测特异抗体的类型;
4、所用抗体/亲和力怎么样 。
检测抗原:
常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法,其次是竞争法,但竞争法在具体 实验中有些困难;T别是检测微生物的抗原,因为其需标记抗原,对于某些抗原很难做到甚至是不可能的。在竞争法中,没标记的抗原与标本直接混合在一起,许多标本中含有enzyme inhibitor或蛋白A样物质(例如粪便),可影响elisa结
检测抗体:
检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法,这个方法用于检测特Y性IgG,IgA盒IgM。这个方法的第yi步是因相捕获的抗体是否是特异抗原的抗体。
间接elisa在家侧IgG时比较简单,但不适用于检测其他种类的抗体。
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