elisa进口试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验,已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和Vitamin H标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系
操作步骤:
1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9、在450nm波长处测定各孔的OD值。
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