实验室用人elisa试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特Y性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性较高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-Polystyrene微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保Z试验结果的特Y性与稳定性。
试剂盒操作步骤 :
1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为<span>5</span>倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液:将20、倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
5、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
6、温育:操作同3。
7、洗涤:操作同5。
8、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟
9、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
10、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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